在治療性抗體開(kāi)發(fā)中，快速識(shí)別具有可開(kāi)發(fā)潛力的候選分子至關(guān)重要。研發(fā)人員亟需高效策略，在早期階段即剔除存在缺陷的候選分子，從而將研發(fā)資源集中于先導(dǎo)分子。

01. MaxCyte工作流程：

采用工程化CHO細(xì)胞系（含F(xiàn)lp重組酶介導(dǎo)的靶向整合位點(diǎn)），與Flp重組酶表達(dá)質(zhì)粒及編碼抗生素抗性基因的IgG質(zhì)粒文庫(kù)共轉(zhuǎn)染。電穿孔后細(xì)胞經(jīng)短時(shí)間恢復(fù)培養(yǎng)，隨后轉(zhuǎn)移至含抗生素的選擇性培養(yǎng)基中連續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)9天。篩選結(jié)束后，收集約 500 萬(wàn)細(xì)胞，提取mRNA，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄并用于高通量測(cè)序分析。

02. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

MaxCyte電穿孔技術(shù)具有良好的可擴(kuò)展性和可重復(fù)性，能夠在操作流程更簡(jiǎn)便、更快速的前提下，實(shí)現(xiàn)更優(yōu)的序列多樣性與更全面的文庫(kù)覆蓋度。

如下圖A所示，在所有測(cè)試的細(xì)胞數(shù)量條件下，MaxCyte電穿孔所獲得的序列多樣性均高于對(duì)照電穿孔方法。此外，由于另一種方法每次僅能轉(zhuǎn)染約500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，因此每輪實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行多批次轉(zhuǎn)染。相比之下，MaxCyte電穿孔可在任意細(xì)胞數(shù)量下通過(guò)單次處理完成高效轉(zhuǎn)染，大大簡(jiǎn)化了操作流程。

進(jìn)一步通過(guò)Morisita重疊指數(shù)對(duì)兩種電穿孔方法在不同實(shí)驗(yàn)條件下的文庫(kù)代表性進(jìn)行了評(píng)估（見(jiàn)下圖C）。結(jié)果顯示，與原始質(zhì)粒文庫(kù)（淺藍(lán)色方框）相比，MaxCyte電穿孔所得樣本的Morisita重疊指數(shù)普遍更高，表明其生成的細(xì)胞群體在表達(dá)IgG序列方面更接近原始文庫(kù)。

此外，比較同種方法在不同批次間轉(zhuǎn)染結(jié)果的一致性（黑色方框），MaxCyte方法的最小重疊指數(shù)高達(dá)0.96，充分體現(xiàn)了MaxCyte電穿孔技術(shù)在實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和操作一致性方面的顯著優(yōu)勢(shì)。

03. 總結(jié)：

MaxCyte電穿孔技術(shù)能夠顯著提升序列多樣性和文庫(kù)覆蓋度，其技術(shù)優(yōu)勢(shì)包括：